结果页面的每一列数字，背后是什么
PrimerCat 不只给你一个排名列表——结果页面随结果同步呈现了推理依据、特异性状态和设计边界。这里解释每项数据的来源，以及它能回答哪些问题、回答不了哪些问题。
结果不是黑箱打分。每一对引物或每一条 gRNA 的得分，都可以在结果页逐项追溯：Tm、GC%、跨外显子状态、Bowtie2 / BLAST 命中数……推荐理由和设计限制一并展示。
结果页面已经给了你什么
下面六项信息已经内嵌在每条结果里——不需要额外查阅文献，打开结果页就能看到。
系统自动从 NCBI RefSeq 选取的主转录本编号（NM_XXXXXX.X）、外显子数量、CDS 长度，以及选择该转录本的依据（CDS 完整性优先）。
左右引物的 Tm（熔解温度）、GC%、发卡 ΔG、自身 3' 末端互补热力学值——均由 Primer3 在设计阶段计算，并在参数越界时直接过滤掉该候选。
每条引物经 Bowtie2 全基因组比对（hg38/mm10）后的命中情况：唯一命中 / 脱靶命中数 / 无命中，并标注最高相似度百分比。
扩增子是否横跨至少一个外显子–外显子连接处，标记为「跨外显子 ✓」或「同一外显子」，以及扩增子长度（bp）。
总分由 Tm 差、GC% 偏差、特异性、外显子跨越、扩增子大小、引物末端稳定性六个子分加权合并，每项得分可在结果卡展开区查看。
gRNA 结果页包含 GC%、种子区连续 G 计数、PAM 邻近区碱基偏好、脱靶命中数——四项均为序列特征估算，结果页已标注「需实验验证」。
每个工具的覆盖范围与边界
下面列出每个工具明确覆盖的内容（✓），以及它不处理或边界情况（⚠）。
如何读懂特异性状态标签
Bowtie2 / BLAST 仅找到唯一高相似度命中，或脱靶命中数 ≤2 且脱靶相似度 <80%。可作为第一选择，仍建议凝胶或溶解曲线验证。
发现 >2 处 ≥80% 相似度的脱靶命中，或命中位置落在多个基因座。建议检查脱靶位点的基因功能后再决定是否使用。
存在多处高相似度（>90%）脱靶命中，该引物或 gRNA 在基因组中重复出现。强烈建议优先选用排名靠前的特异性引物。
Bowtie2 在基因组中完全未检测到该序列（允许 ≤2 错配）。可能是序列过短、含大量简单重复，或物种基因组索引不可用。
准备好了？从这里开始
了解了数据来源和边界，就能更有把握地解读结果——也知道下一步该做什么实验来验证。